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2. ERGEBNISSE 54

Nach ca. 16 h zeigte der starke Anstieg des DO-Werts den vollständigen Konsum des

Glycerins durch die Hefe an (Abbildung 2.7). Daraufhin wurde viermal mit jeweils 1 % (v/v)

Glycerin nachtitriert. Wobei durch die größere Zellmasse das Glycerin wesentlich schneller

wie zu Beginn verbraucht wurde (Fütterungspulse mit Glycerin werden durch die

unterstrichen Dreiecke in Abbildung 2.7 repräsentiert).

Als Indikator, daß das Glycerin jeweils vollständig verbraucht war, wurde wieder der DO-

Gehalt verwendet, stieg dieser innerhalb von zwei minuten um mindestens 10 %, wurde

wieder Glycerin zugefüttert. Dies führte nahezu zu einer Verdoppelung der Biomasse. Nach

einer Fermentationsdauer von 24 h wurde mit der Induktion durch Zugabe von Methanol

begonnen. Während sich der CO

-Wert im A/jointfilesconvert/483621/bgas nur sehr langsam veränderte (nicht gezeigt)

konnte durch verfolgen des DO-Wertes, ebenso wie beim Glycerin, sehr schnell der Mangel

an Methanol detektiert werden. So wurden immer 0,5 % (v/v) Methanol zur Fermenterbrühe

gegeben, sobald eine signifikante Erhöhung des DO-Gehalts zu beobachten war. Nach der

Zugabe sank der DO-Wert in der Regel ebenso schnell wieder ab, wie er bei C-Quellen

Limitierung gestiegen war.

Mit dieser einfachen Fütterungsstrategie konnte die Ausbeute während einer Fermentations-

dauer von 92 h auf 500 U ml

-1

aktiver Lipase gesteigert werden, dies entspricht einer Produk-

tivität von 5435 U l

-1

. Mit dieser Fermentation konnte gezeigt werden, daß sich eine Stei-

gerung der Biomasse und eine verbesserte Fütterungsstrategie positiv auf die Ausbeute an

aktiver Lipase auswirken.

2.2.3 Kultivierung in synthetischem Medium ohne Methanol-Analytik

Die Arbeiten in synthetischem Medium wurden in einem Braun Fermenter (Biostat E; 5 l)

durchgeführt, an den eine computergesteuerte Mikrobürette zur Fütterung angeschlossen

wurde. Mit dieser konnte jede Minute eine definierte Menge Glycerin bzw. Methanol zur

Fermenterbrühe zutitriert werden.

Durch die Kultivierungsversuche in Schüttelkolben unter Verwendung von Medien mit

Glycerin bzw. Methanol als einziger C-Quelle konnte in Kapitel 2.1.2.2 gezeigt werden, daß

alle getesteten mit pPICZαA_ROL transformierten Pichia Klone dem Mut

Phänotyp ange-

hörten.

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