Bosch PPS8 C2 Series Manuel d'utilisateur Page 125
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- Table des matières
- MARQUE LIVRES
Noté. / 5. Basé sur avis des utilisateurs
5. MATERIAL & METHODEN 124
Tabelle 5.9: Zusammensetzung einer typischen Sequenzierreaktion
Komponente Volumen
DNA Sequenzierkit (Polymerase, Puffer,
dNTP´s, ddNTP´s)
4 µl
DNA 4 µl (200 – 500 ng)
Primer (1 pmol µl
-1
)4 µl
dH
2
O8 µl
Endvolumen 20 µl
Tabelle 5.10: Programm zur Vervielfältigung von DNA zur DNA Sequenzierung
Schritt Temperatur (° C) Zeit (Min.) Zyklen
Denaturierung 95 6:00 1
Denaturierung
Anlagerung
Extension
95
55
72
0:40
0:30
4:00
25
Extension 72 6:00 1
Die Sequenzierreaktion (normalerweise 20 µl) wurde mit 80 µl dH
2
O vermischt und10 µl
NaAc-Lösung (3 M, pH 5,3) sowie 250 µl Ethanol (100 %, RT) zugegeben. Nach 5 Minuten
Inkubation bei Raumtemperatur wurden die Proben 20 Minuten zentrifugiert (14000 Umin,
Eppendorf 5417R, 16 °C), der Überstand vom Pellet sorgfältig entfernt, das Pellet mit 250 µl
Ethanol (70 %, RT) gewaschen und nochmals 5 Minuten zentrifugiert (14000 Umin,
Eppendorf 5417R, RT). Nach Entfernen des Alkohols wurde das Pellet im Vakuum
getrocknet, bevor die DNA in 3 µl eines Gemisches (5:1) aus Formamid und EDTA (25 mM,
pH 8,0) aufgenommen und denaturiert (2 Min., 90 °C) wurde.
Die Analyse der DNA Fragmente erfolgt in einem denaturierendem Harnstoffgel. Für dieses
wurde 30 g Harnstoff (Gibco o. Roth) mit 9,0 ml 40 % (w/v) Acrylamidlösung (Acryl-
amid:Bisacrylamid =19:1), 6 ml TBE-Puffer (10 x Puffer, Gibco o. Roth) und 23,5 ml dH
2
O
vermischt und unter Rühren leicht erwärmt, bis sich der Harnstoff vollständig löste. Nach
- Strukturbestimmung 1
- Stefan Minning 1
- PETER HØEG 2
- Danksagung 3
- INHALTSVERZEICHNIS 3 4
- INHALTSVERZEICHNIS 5 6
- INHALTSVERZEICHNIS 7 8
- INHALTSVERZEICHNIS 8 9
- ABBILDUNGSVERZEICHNIS 9 10
- ABBILDUNGSVERZEICHNIS 10 11
- TABELLENVERZEICHNIS 11 12
- BKÜRZUNGSVERZEICHNIS 12 13
- BKÜRZUNGSVERZEICHNIS 13 14
- 1 Einleitung 15
- INLEITUNG 15 16
- INLEITUNG 16 17
- INLEITUNG 17 18
- INLEITUNG 18 19
- INLEITUNG 19 20
- INLEITUNG 20 21
- INLEITUNG 21 22
- INLEITUNG 22 23
- INLEITUNG 23 24
- INLEITUNG 24 25
- INLEITUNG 25 26
- INLEITUNG 26 27
- 1. EINLEITUNG 27 28
- Glyceridestern 28
- INLEITUNG 28 29
- 1.2 Expressionssysteme 30
- INLEITUNG 30 31
- INLEITUNG 31 32
- INLEITUNG 32 33
- INLEITUNG 33 34
- 1.3 Proteinreinigung 35
- INLEITUNG 35 36
- INLEITUNG 36 37
- INLEITUNG 37 38
- INLEITUNG 38 39
- INLEITUNG 39 40
- 1.4 Aufgabenstellung 41
- 2 Ergebnisse 42
- RGEBNISSE 42 43
- RGEBNISSE 44 45
- RGEBNISSE 46 47
- RGEBNISSE 48 49
- RGEBNISSE 49 50
- RGEBNISSE 50 51
- RGEBNISSE 51 52
- RGEBNISSE 54 55
- Zeit (h) 56
- RGEBNISSE 56 57
- RGEBNISSE 57 58
- RGEBNISSE 58 59
- Aktivität (U ml 60
- MeOH (g l 60
- RGEBNISSE 60 61
- RGEBNISSE 61 62
- RGEBNISSE 62 63
- RGEBNISSE 63 64
- RGEBNISSE 64 65
- RGEBNISSE 65 66
- RGEBNISSE 66 67
- RGEBNISSE 67 68
- RGEBNISSE 68 69
- RGEBNISSE 69 70
- (P. pastoris)E F S D G G 71
- RGEBNISSE 71 72
- Temperatur (°C) 73
- RGEBNISSE 73 74
- RGEBNISSE 74 75
- RGEBNISSE 75 76
- Fluoreszenz 77
- Relative GFP Konzentration 77
- RGEBNISSE 77 78
- 2. ERGEBNISSE 78 79
- Ende des EGFP 79
- RGEBNISSE 79 80
- RGEBNISSE 80 81
- RGEBNISSE 81 82
- RGEBNISSE 82 83
- RGEBNISSE 83 84
- RGEBNISSE 84 85
- RGEBNISSE 85 86
- RGEBNISSE 86 87
- (HeliTagX 88
- HeliTag M13 89
- RGEBNISSE 89 90
- 3 Diskussion 91
- ISKUSSION 91 92
- ISKUSSION 92 93
- ISKUSSION 93 94
- ISKUSSION 94 95
- ISKUSSION 96 97
- Pichia pastoris 98
- ISKUSSION 98 99
- ISKUSSION 99 100
- ISKUSSION 100 101
- ISKUSSION 101 102
- ISKUSSION 102 103
- ISKUSSION 103 104
- ISKUSSION 104 105
- ISKUSSION 105 106
- 4 Zusammenfassung 107
- USAMMENFASSUNG 107 108
- 5 Material & Methoden 109
- 5.2 Chemikalien 110
- 5.3 Verwendete Plasmide 110
- Sequenz (5´ → 3´) 111
- Verwendung 111
- ATERIAL & METHODEN 111 112
- ATERIAL & METHODEN 112 113
- ATERIAL & METHODEN 113 114
- ATERIAL & METHODEN 114 115
- ATERIAL & METHODEN 115 116
- ATERIAL & METHODEN 116 117
- ATERIAL & METHODEN 117 118
- ATERIAL & METHODEN 118 119
- ATERIAL & METHODEN 119 120
- ATERIAL & METHODEN 120 121
- ATERIAL & METHODEN 121 122
- ATERIAL & METHODEN 122 123
- ATERIAL & METHODEN 123 124
- ATERIAL & METHODEN 124 125
- ATERIAL & METHODEN 125 126
- Pfu DNA 127
- Polymerase 127
- XL1-Blue 127
- ATERIAL & METHODEN 127 128
- 5.7 Arbeiten mit Proteinen 129
- ATERIAL & METHODEN 129 130
- ATERIAL & METHODEN 130 131
- 5.8 Proteinreinigung 132
- ATERIAL & METHODEN 132 133
- 5.10 Aktivitätstests 134
- ATERIAL & METHODEN 134 135
- 6 Literatur 136
- ITERATUR 136 137
- ITERATUR 137 138
- ITERATUR 138 139
- ITERATUR 139 140
- ITERATUR 140 141
- ITERATUR 141 142
- ITERATUR 142 143
- ITERATUR 143 144
- ITERATUR 144 145
- ITERATUR 145 146
- ITERATUR 146 147
- ITERATUR 147 148
- ITERATUR 148 149
- ITERATUR 149 150
- ITERATUR 150 151
- 6. LITERATUR 151 152
- Lebenslauf 153
Produits connexes et manuels pour Plaques chauffantes Bosch PPS8 C2 Series
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